%A 马培晗, 张灵敏, 李茜, 路宁, 温华, 张明鑫 %T ALKBH5对食管鳞状细胞癌恶性生物学行为的影响及相关机制研究 %0 Journal Article %D 2025 %J 国际肿瘤学杂志 %R 10.3760/cma.j.cn371439-20240607-00012 %P 79-88 %V 52 %N 2 %U {https://gjzlx.sdfmu.edu.cn/CN/abstract/article_11552.shtml} %8 2025-02-08 %X

目的 研究m6A去甲基化酶ALKBH5在食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞中的作用及潜在机制。方法 通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测ALKBH5在正常食管黏膜上皮细胞（Het-1A）和ESCC细胞株（Eca109、KYSE30、KYSE150、KYSE410）中的表达；构建ALKBH5过表达/沉默的瞬转细胞株（siRNA转染后分为si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组）及对照细胞株；分别采用MTT法、细胞划痕实验、细胞凋亡实验研究ALKBH5对ESCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响；通过转录组测序（RNA-seq）及甲基化RNA免疫共沉淀测序（MeRIP-seq）技术测序交集筛选出差异表达基因并采用RT-qPCR检测ALKBH5对该基因表达的影响。结果 实时荧光定量PCR结果显示，ALKBH5 RNA在Het-1A、Eca109、KYSE30、KYSE150及KYSE410细胞株中的相对表达量分别为1.03±0.28、0.46±0.02、0.23±0.10、0.04±0.02、0.05±0.00，差异有统计学意义（F=444.60，P<0.001）；蛋白质印迹法显示，ALKBH5蛋白在Het-1A、Eca109、KYSE30、KYSE150及KYSE410细胞株中的相对表达量分别为1.14±0.03、0.88±0.04、0.66±0.01、0.69±0.01、0.95±0.01，差异有统计学意义（F=139.90，P<0.001）；MTT实验显示，KYSE30细胞对照组与ALKBH5过表达组72 h的吸光度（A）值分别为0.86±0.01、1.25±0.01，差异有统计学意义（t=46.93， P<0.001）；KYSE150细胞对照组与ALKBH5过表达组72 h的A值分别为1.00±0.03、1.43±0.02，差异有统计学意义（t=16.80， P<0.001）；KYSE30细胞对照组与si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组96 h的A值分别为0.98±0.01、0.85±0.02、0.80±0.09，差异有统计学意义（F=72.97， P<0.001），KYSE30细胞对照组的A值均大于si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组（均P<0.001）；KYSE410细胞对照组与si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组72 h的A值分别为1.28±0.02、1.15±0.02、1.08±0.05，差异有统计学意义（F=16.97， P=0.003），KYSE410细胞对照组A值均大于si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组（P=0.020；P=0.003）。细胞划痕实验显示，划痕后48 h，KYSE30细胞对照组与过表达ALKBH5组的迁移率分别为（27.39±0.54）%、（48.89±5.12）%，差异有统计学意义（t=5.90，P=0.004）；KYSE150细胞对照组与过表达ALKBH5组的迁移率分别为（39.67±0.43）%、（62.20±0.60）%，差异有统计学意义（t=43.15，P<0.001）；KYSE30细胞对照组与si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组的迁移率分别为（25.08±1.86）%、（18.75±1.59）%、（7.67±0.52）%，差异有统计学意义（F=74.28，P<0.001），KYSE30细胞对照组的迁移率均大于si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组（P=0.010；P<0.001）；KYSE410细胞对照组与si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组的迁移率分别为（38.70±0.41）%、（28.27±1.01）%、（19.40±0.47）%，差异有统计学意义（F=400.20，P<0.001），KYSE410细胞对照组的迁移率均大于si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组（均P<0.001）。细胞凋亡实验显示，KYSE30细胞对照组与过表达ALKBH5组的凋亡率分别为（9.59±0.88）%、（4.81±0.89）%，差异有统计学意义（t=6.23，P=0.001）；KYSE150细胞对照组与过表达ALKBH5组的凋亡率分别为（8.36±0.09）%、（6.42±0.19）%，差异有统计学意义（t=12.90，P<0.001）；KYSE30细胞对照组与si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组的凋亡率分别为（4.31±0.19）%、（5.72±0.30）%、（8.94±0.71）%，差异有统计学意义（F=53.46，P<0.001），KYSE30细胞对照组的凋亡率均小于si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组（P=0.049；P<0.001）；KYSE410细胞对照组与si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组的凋亡率分别为（4.45±0.36）%、（5.40±0.11）%、（6.64±0.15）%，差异有统计学意义（F=43.36，P<0.001），KYSE410细胞对照组的凋亡率均小于si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组（P=0.016；P<0.001）。通过RNA-seq及MeRIP-seq技术测序交集筛选出差异表达基因IGF2BP3，RT-qPCR结果显示，KYSE30中IGF2BP3的相对表达量在对照组和过表达ALKBH5组分别为1.01±0.10、1.41±0.10，差异有统计学意义（t=4.06，P=0.015）；KYSE150中IGF2BP3的相对表达量在对照组和过表达ALKBH5组分别为1.00±0.10、1.94±0.24，差异有统计学意义（t=5.08，P=0.007）；KYSE410中IGF2BP3的相对表达量在对照组和si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组分别为1.01±0.14、0.67±0.04、0.41±0.04，差异有统计学意义（F=24.36，P=0.001），KYSE410对照组中IGF2BP3的相对表达量均大于si-ALKBH5-1、si-ALKBH5-2组（P=0.017；P=0.001）。结论 ALKBH5在ESCC细胞株中低表达，但ALKBH5过表达时可促进ESCC细胞的增殖和迁移，并抑制细胞凋亡，可能与某种负反馈调节机制有关。IGF2BP3可能是ALKBH5作用的下游靶点。